一、細胞復蘇的原理

細胞復蘇的原理是基于將細胞從液氮或-80℃冰箱中快速取出并使其恢復活力的技術(shù)。遵循“快融"原則，短時(shí)間內融化胞外結晶，避免緩慢融化導致水分滲入胞內形成胞內再結晶損傷細胞，融化越快，細胞損傷越小。

二、細胞復蘇的小Tips

1. 為防止凍存管在水浴鍋中升溫時(shí)突然爆炸，可以在放入水浴鍋前先在生物安全柜中把蓋子擰松一下然后再擰上。

2. 從液氮罐里拿出細胞不必急于放入水浴鍋中，因為細胞從液氮的-196℃上升到-80℃這個(gè)過(guò)程對細胞是沒(méi)有損害的，我們有足夠的時(shí)間處理。但是，一旦細胞融化，應立即將其轉移至預先準備的培養基中，以稀釋細胞凍存液中的DMSO，因為在常溫下高濃度DMSO對細胞的損害較大。

3. 解凍細胞時(shí)不必等待細胞完quan融化才從水浴鍋中取出，當觀(guān)察到冰塊浮起來(lái)即可。此外，水浴時(shí)間應盡量不超過(guò)1分鐘，整個(gè)解凍過(guò)程盡量在3分鐘內完成

4. 將解凍的細胞轉移至培養基中時(shí)，應確保操作迅速并避免污染。通過(guò)這些注意事項和技巧的應用，可以有效地提高細胞復蘇的成功率和細胞的活力。我們首先將已經(jīng)融化的部分轉移到含有新鮮培養基的離心管中。接著(zhù)，從離心管中吸取少量的培養基到凍存管中。這時(shí)，剩余的冰塊會(huì )迅速融化。然后，我們將這些融化后的液體全部轉移回離心管，進(jìn)行離心，以去除上清液（這樣做是為了去除DMSO）。之后，我們加入新鮮的培養基，輕輕搖晃，使其混合均勻，然后接種到培養瓶中進(jìn)行培養。細胞復蘇后，對于貼壁細胞，復蘇24小時(shí)后，我們會(huì )在顯微鏡下觀(guān)察。如果細胞的密度達到了80%，那么就可以進(jìn)行正常的傳代培養。如果密度還沒(méi)有達到80%，那么我們就會(huì )繼續培養，直到48小時(shí)后再進(jìn)行換液。

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