生物發(fā)光實(shí)驗

1.確定螢光素酶

常見(jiàn)的熒光素酶包括螢火蟲(chóng)熒光素酶（Firefly luciferase，Fluc）、海洋蛋白質(zhì)熒光素酶（Renilla luciferase，Rluc）和高司氏熒光素酶。它們在特定條件下都能催化各自的底物產(chǎn)生相應的光，而無(wú)需外部激發(fā)器。其中，Fluc是應用最為廣泛的熒光素酶。

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2.構建穩轉螢光素酶細胞株

穩轉株即穩定表達細胞株，指的是基于某一細胞系構建的持續過(guò)表達或干擾某特定基因的細胞系。慢病毒感染-藥物篩選法是目前廣泛應用的穩轉株構建方法，具有高效整合、目標細胞廣泛等特點(diǎn)。

3.驗證穩轉株

構建得到穩轉株后，可以進(jìn)行體外實(shí)驗以驗證Fluc穩轉株效果?？梢詫⑸L(cháng)良好的Fluc細胞消化，隨后用培養基稀釋成系列梯度濃度并分別接種于96孔板中，每孔100 μL，每個(gè)濃度設置三平行孔。

4.穩轉株注射動(dòng)物

成功構建穩轉株后，即可進(jìn)行動(dòng)物移植模型構建。

5. 注射底物

注射的細胞一般會(huì )在2-3周成瘤（具體時(shí)間根據細胞種類(lèi)，接種數量，細胞活力會(huì )有所不同），可以根據實(shí)驗設計進(jìn)行一定處理。

6.活體成像

活體成像建議直接使用帶有麻醉裝置的小動(dòng)物活體成像儀，這樣操作更方便，而且可以更準確的控制小鼠麻醉的情況。如儀器不帶麻醉裝置，也可自行麻醉小鼠后置于小動(dòng)物活體成像儀中進(jìn)行成像。檢測途中要注意防止小鼠中途蘇醒而離開(kāi)成像臺。

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