細胞凍存是細胞培養中的關(guān)鍵環(huán)節，直接影響細胞存活率和活力，關(guān)系到后續細胞實(shí)驗能否按照計劃有效地進(jìn)行。掌握好細胞凍存的小Tips，有助您做好細胞培養式樣，讓我們一起來(lái)看看吧！

一、細胞凍存的基本原則

細胞凍存遵循“慢凍"原則：讓細胞在超低溫環(huán)境中緩慢進(jìn)入“冬眠"狀態(tài)，暫時(shí)停止其代謝活動(dòng)。目的是保存細胞樣本，方便復蘇。

二、細胞凍存的注意事項

1. 溫度控制不穩定可能導致細胞存活率降低

二甲基亞砜（DMSO）或甘油常作為冷凍保護劑，保護細胞。DMSO能快速穿透細胞膜進(jìn)入細胞，降低冰點(diǎn)，延緩凍存過(guò)程，同時(shí)增加細胞膜的通透性，提高細胞內離子濃度，減少細胞內冰晶的形成，從而達到保護細胞的目的。

2. 使用程序降溫盒的注意事項

（1）異丙醇的量必須足夠，且使用5次后需要更換，以確保凍存效果。而泡沫程序降溫盒需要在恢復到室溫后使用。對于短期的細胞凍存，可以考慮使用-80℃的超低溫冰箱。

（2）盡量選擇對數生長(cháng)期的細胞進(jìn)行凍存，此時(shí)的細胞匯合度應達到80%以上。這樣可以大大提高細胞復蘇后的存活率。對于嬌貴的細胞，我們可以通過(guò)適當提高凍存液中血清的比例來(lái)保證獲得更高的存活率和細胞活力。

（3）細胞凍存密度不能太低，因為在細胞凍存時(shí)會(huì )損失部分細胞，所以適當提高細胞密度有助于提高細胞復蘇存活率。

（4）細胞凍存液需要提前配制。在配制細胞凍存液時(shí)（或直接使用商業(yè)的細胞凍存液，如wako的無(wú)血清細胞凍存液302-14681），由于DMSO溶解在培養基中會(huì )釋放大量熱量，因此細胞凍存液需要提前配制，切忌直接將DMSO加入含有細胞的培養基中，以避免損傷細胞。

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