MTT實(shí)驗方法簡(jiǎn)介
       MTT法，是一種檢測細胞存活和生長(cháng)增殖的方法。
       檢測原理：活細胞線(xiàn)粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結晶甲瓚(Formazan)并沉積在細胞中，而死細胞無(wú)此功能。二甲基亞砜(DMSO )能溶解細胞中的甲瓚，用酶標儀在490nm波長(cháng)（或其他波長(cháng)）處測定其光吸收值，在一定細胞數量范圍內，MTT結晶形成的量與細胞數成正比。根據測得的吸光度值(OD值)，來(lái)判斷活細胞數量，OD值越大，細胞活性越強(如果是測藥物毒性，則表示藥物毒性越小)。
       該方法靈敏度高、經(jīng)濟實(shí)用，已廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測、大規模藥物篩選、細胞毒性試驗以及細胞放射敏感性測定等等。
 
 
操作方法
貼壁細胞
1、收集對數期細胞，調整細胞懸液濃度，每孔加入100ul,鋪板使待測細胞調密度1000-10000孔，（邊緣孔用無(wú)菌PBS填充）。
2、5%CO2，37℃孵育，細胞單層鋪滿(mǎn)孔底（96孔平底板）,加入濃度梯度的藥物,原則上，細胞貼壁后即可加藥，或兩小時(shí)，或半天時(shí)間，但我們常在前一天下午鋪板，次日上午加藥.一般5-7個(gè)梯度,每孔100ul,設3-5個(gè)復孔.建議設5個(gè)，否則難以反應真shi情況
3、5%CO2，37℃孵育16-48小時(shí)，倒置顯微鏡下觀(guān)察。
4、每孔加入20ulMTT溶液（5mg/ml，即0.5%MTT），繼續培養4h。若藥物與MTT能夠反應，可先離心后棄去培養液，小心用PBS沖2-3遍后，再加入含MTT的培養液。
5、終止培養，小心吸去孔內培養液。
6、每孔加入150ul二甲基亞砜，置搖床上低速振蕩10min，使結晶物充分溶解。在酶聯(lián)免疫檢測儀OD490nm處測量各孔的吸光值。
7、同時(shí)設置調零孔（培養基、MTT、二甲基亞砜），對照孔（細胞、相同濃度的藥物溶解介質(zhì)、培養液、MTT、二甲基亞砜）
 
懸浮細胞
1、收集對數期細胞，調節細胞懸液濃度1×106/ml，按次序將①補足的1640（無(wú)血清）培養基40ul ；②加Actinomycin D（有毒性）10ul用培養液稀釋 l?g/ml，需預試尋找*稀釋度，1:10-1:20)；③需檢測物10ul；④細胞懸液50ul（即5×104cell/孔），共100ul加入到96孔板（邊緣孔用無(wú)菌水填充）。每板設對照（加100?(儲存液100 1640）。
2、置37℃，5%CO2孵育16-48小時(shí)，倒置顯微鏡下觀(guān)察。
3、每孔加入10 ul MTT溶液（5 mg/ml，即0.5%MTT），繼續培養4 h。（懸浮細胞推薦使用WST-1，培養4 h后可跳過(guò)步驟4），直接酶聯(lián)免疫檢測儀OD570nm（630nm校準）測量各孔的吸光值）
4、離心（1000轉x10min），小心吸掉上清，每孔加入100 ul二甲基亞砜，置搖床上低速振蕩10 min，使結晶物充分溶解。在酶聯(lián)免疫檢測儀OD570nm（630nm校準）測量各孔的吸光值。
5、同時(shí)設置調零孔（培養基、MTT、二甲基亞砜），對照孔（細胞、相同濃度的藥物溶解介質(zhì)、培養液、MTT、二甲基亞砜），每組設定3復孔。
 
結果示例
 
 
客戶(hù)提供
1、實(shí)驗信息，包括細胞類(lèi)型，細胞處理藥物和條件。
2、實(shí)驗結果要求等。
  
服務(wù)流程
1、提交項目課題相關(guān)需求和資料。
2、與我們的專(zhuān)業(yè)技術(shù)團隊討論項目細節。
3、根據討論后的意見(jiàn)對實(shí)驗方案進(jìn)行修改。
4、雙方均滿(mǎn)意并達成一致，簽訂技術(shù)服務(wù)合同。
5、開(kāi)展實(shí)驗，按期完成合同規定的內容。
6、結題，提供實(shí)驗原始結果和分析結果、實(shí)驗流程、實(shí)驗條件等等。
  
我們的優(yōu)勢
1、多種細胞類(lèi)型供實(shí)驗需要，包括各種腫瘤細胞系，基因敲除細胞等等。
2、專(zhuān)業(yè)的操作人員。
3、高規格實(shí)驗室。
4、數據結果交付周期快。
 
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