產(chǎn)品名稱(chēng)：Elabscience小鼠胰島素ELISA試劑盒(E-EL-M1382)現貨供應

產(chǎn)品貨號：E-EL-M1382

品牌：Elabscience

產(chǎn)品規格：96T;48T;96T*5

儲存條件：試劑盒在 2-8℃可保存 3 個(gè)月。

實(shí)驗步驟：

1.分別設定標準孔、空白孔和樣本孔。標準孔加入 100 μL倍比稀釋的標準品， 空白孔加入 100 μL 標準品&樣本稀釋液，其余孔加入 100 μL 待測樣本(建 議所有的待檢樣本和標準品在檢測中設立復孔；建議通過(guò)預實(shí)驗或咨詢(xún)技 術(shù)支持確定待檢樣本的稀釋倍數)。給酶標板覆膜，37℃孵育 90 分鐘。提 示：加樣時(shí)將樣品加于酶標板底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，避免 產(chǎn)生氣泡。加樣時(shí)間宜控制在 10 分鐘內。

2.甩盡孔內液體，不用洗滌。每個(gè)孔中加入生物素化抗體工作液 100 μL，酶 標板加上覆膜，37℃溫育 1 小時(shí)。

3.甩盡孔內液體，在潔凈的吸水紙上拍干。每孔加洗滌液 350 μL，浸泡 1 分 鐘，吸去或甩掉酶標板內的液體，拍干。重復此洗板步驟 3 次。提示：此 處與其他洗板步驟都可使用洗板機(參考北京拓普 DEM-3 型洗板機參數設 置：2 點(diǎn)吸，每孔加入洗滌液 350 μL，振板 5 秒，吸液 0.5 秒)。洗板完成 后請立即進(jìn)行下步操作，不要讓微孔板干燥。

4.每孔加 HRP 酶結合物工作液 100 μL，酶標板加上覆膜，37℃溫育 30 分鐘。

5.甩盡孔內液體，洗板 5 次，方法同步驟 3。

6.每孔加底物溶液(TMB)90 μL，酶標板加上覆膜，37℃避光孵育 15 分鐘左 右。提示：根據實(shí)際顯色情況酌情縮短或延長(cháng)，但不可超過(guò) 30 分鐘。當標 準孔出現明顯梯度時(shí)(前 4 個(gè)顯色孔出現明顯藍色梯度)，即可終止。提前 15 分鐘打開(kāi)酶標儀預熱。

7.每孔加終止液 50 μL，終止反應。提示：終止液的加入順序應盡量與底物溶 液的加入順序相同。

8.立即用酶標儀在 450 nm 波長(cháng)測量各孔的光密度(OD 值)。

實(shí)驗結果：

1. 計算標準品和樣本復孔的平均OD值并減去空白孔的OD值作為校正值。以 濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在雙對數坐標軸上擬合四參數邏輯函數的 標準曲線(xiàn)。
2.若樣品OD值高于標準曲線(xiàn)上限，應適當稀釋后重測并在計算樣本濃度時(shí)乘 以相應的稀釋倍數。

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