活性氧檢測使我們在細胞研究中非常重要的一個(gè)實(shí)驗，檢測細胞內ROS水平對于理解一些藥物作用的信號通路和潛在作用機制具有重要意義。

活性氧檢測試劑盒(Reactive Oxygen Species Assay Kit，也稱(chēng)ROS Assay Kit)是一種利用熒光探針DCFH-DA進(jìn)行活性氧檢測的試劑盒。

DCFH-DA是比較常用的醫腫活性氧檢測探針，探針本身沒(méi)有熒光，可以自由出入細胞，當進(jìn)入到細胞內后，會(huì )被脂酶水剪成DCFH，DCFH是有熒光的，通過(guò)488nm（藍光）激發(fā)之后，使用FITC（525nm）熒光通道進(jìn)行檢測，觀(guān)測陽(yáng)性比例以及mean值的變化來(lái)反應被氧化的水平~

碧云天活性氧檢測試劑盒(S0033S)提供了活性氧陽(yáng)性對照試劑Rosup，以便于活性氧的檢測。Rosup是一種混合物(compound mixture),濃度為50mg/ml。

使用說(shuō)明：

1. 裝載探針

對于刺激時(shí)間較短(通常為2小時(shí)以?xún)?的細胞，先裝載探針，后用活性氧陽(yáng)性對照或自己感興趣的藥物刺激細胞。對于細胞刺激時(shí)間較長(cháng)(通常為6小時(shí)以上)的細胞，先用活性氧陽(yáng)性對照或自己感興趣的藥物刺激細胞，后裝載探針。

2. 檢測

對于原位裝載探針的樣品可以用激光共聚焦顯微鏡直接觀(guān)察，或收集細胞后用熒光分光光度計、熒光酶標儀或流式細胞儀檢測。對于收集細胞后裝載探針的樣品可以用熒光分光光度計、熒光酶標儀或流式細胞儀檢測，用激光共聚焦顯微鏡直接觀(guān)察也可以。

3. 參數設置

使用488nm激發(fā)波長(cháng)，525nm發(fā)射波長(cháng)，實(shí)時(shí)或逐時(shí)間點(diǎn)檢測刺激前后熒光的強弱。DCF的熒光光譜和FITC非常相似，可以用FITC的參數設置檢測DCF。

4. 其它說(shuō)明

陽(yáng)性對照可以按照1:1000的比例使用。例如裝載好探針的細胞共1毫升，可以加入1微升的陽(yáng)性對照刺激。通常刺激后20-30分鐘內可以觀(guān)察到非常顯著(zhù)的活性氧水平升高。對于不同的細胞，活性氧陽(yáng)性對照的效果可能有較大的差別。如果在刺激后30分鐘內觀(guān)察不到活性氧的升高，可以適當提高活性氧陽(yáng)性對照的濃度。如果活性氧升高得過(guò)快，可以適當降低活性氧陽(yáng)性對照的濃度。

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