細胞培養幾乎是所有細胞生物學(xué)實(shí)驗的基礎。其中，細胞傳代是將部分細胞分離出來(lái)，重新接種到新的培養皿中，使細胞重新獲得足夠的營(yíng)養條件和生長(cháng)空間的過(guò)程。那么你知道細胞傳代培養的常見(jiàn)問(wèn)題有哪些嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！

　　1、細胞何時(shí)進(jìn)行傳代

　　通常當細胞生長(cháng)至w全匯合進(jìn)行傳代，避免細胞生長(cháng)過(guò)密，對于特殊情況，比如有接觸抑制的細胞，一般在密度70-80%就進(jìn)行傳代，避免引起細胞分化。

　　2、貼壁細胞胰酶消化如何控制時(shí)間

　　貼壁細胞培養一個(gè)關(guān)鍵步驟胰酶消化，消化過(guò)度會(huì )導致細胞碎片增多，細胞成片脫落，嚴重影響細胞活性，并有部分細胞漂浮，隨棄去的胰酶流失，消化不足則細胞難于從瓶壁上吹下，反復吹打造成細胞損傷，活性下降。

　　一般濃度在0.25-0.5%。作用時(shí)間根據細胞種類(lèi)、作用溫度等因素而變化很大，從幾分鐘到幾十分鐘不等。0.25%的胰酶作用于單層貼壁的細胞，在37度條件下，一般消化1-5分鐘就足夠了。終止是用血清。主要對于新購買(mǎi)的細胞，可以先用低濃度的胰酶去摸索一下消化時(shí)間，可每隔1分鐘鏡下觀(guān)察細胞是否變圓，記錄最佳消化時(shí)間，下一次操作參考之前的記錄來(lái)控制時(shí)間即可。

　　3、如何看活細胞

　　可通過(guò)顯微鏡觀(guān)察：活細胞中間透亮，飽滿(mǎn)，有光澤，死細胞較暗?；蛲ㄟ^(guò)臺盼藍染色來(lái)計算細胞活力，活細胞排斥臺盼蘭，因而染成藍色的細胞是死細胞。有細胞計數儀的，可直接用計數儀計數。

　　4、細胞傳幾代開(kāi)始死亡或細胞存活率不佳，增值變慢

　　可能是培養基使用錯誤或培養基品質(zhì)不佳；血清使用錯誤或血清的品質(zhì)不佳；或者消化過(guò)度，對細胞有嚴重影響；或者是傳代比例不合適；細胞存在污染等。

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