細胞傳代的培養技巧

　　細胞培養是指從體內組織取出細胞在體外模擬體內環(huán)境下，在無(wú)菌、適溫和豐富的營(yíng)養條件下，使其生長(cháng)繁殖，并維持其結構和功能的一種培養技術(shù)。那么你知道細胞傳代的培養技巧有什么嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！

　　一、選擇適合的細胞培養基：

　　合適的細胞培養基是體外細胞生長(cháng)增殖的重要條件之一，培養基不僅提供細胞營(yíng)養和促使細胞生長(cháng)增殖的基礎物質(zhì)，而且還提供培養細胞生長(cháng)和繁殖的生存環(huán)境。

　　二、根據細胞生長(cháng)方式不同又分為貼壁細胞和懸浮細胞：

　　貼壁細胞：必須貼附于支持物表面才能生長(cháng)，見(jiàn)于各種實(shí)體瘤細胞；

　　懸浮細胞：于懸浮狀態(tài)下即可生長(cháng)，不需要貼附于支持物表面，見(jiàn)于各種造血系統腫瘤細胞。

　　正常細胞形態(tài)較好，輪廓清晰，邊緣透亮，細胞增殖狀況良好。當貼壁細胞長(cháng)到密度90%時(shí)，需進(jìn)行傳代。

　　貼壁細胞傳代：

　　丟掉原有的培養基加入復溫的PBS潤洗兩次，吸掉PBS，加入胰酶消化細胞，顯微鏡下觀(guān)察，待細胞變圓，細胞間隙明顯，部分細胞剛開(kāi)始漂浮的時(shí)候加入培養基，然后將細胞小心吹打下來(lái)，1000rpm/min室溫離心5min，棄上清，細胞沉淀用培養基重懸，按合適的密度分到幾個(gè)培養瓶中進(jìn)行下一輪培養。

　　對于較難消化的細胞，可以用2%利多卡yin消化5-8分鐘，然后再棄去，加培養基吹打也可以，對細胞的影響不大。

　　懸浮細胞傳代：

　　懸浮細胞傳代比貼壁細胞傳代操作步驟較簡(jiǎn)單。因為細胞已經(jīng)懸浮在生長(cháng)培養基中，所以無(wú)需進(jìn)行酶處理即可將其從培養容器中取出，整個(gè)過(guò)程更快，對細胞的損傷更小。懸浮細胞多采用離心法傳代，細胞離心后去掉上層清液，沉淀細胞加新培養液后吹打混勻傳代。也可以直接稀釋培養瓶中的細胞并使其繼續擴增，或通過(guò)從培養瓶中取出一部分細胞并將剩余細胞稀釋至適合細胞系的接種密度。

　　一般僅需持續加入新鮮培養基于原培養角瓶中，稀釋細胞濃度即可，若培養液太多時(shí)，將細胞懸液移入離心管中，1000 rpm/min室溫離心5 min。棄上清，細胞沉淀用w全培養液重懸，按要求分瓶(視細胞密度而定1:4-1:8)，每T25瓶加w全培養液至4-5 ml，37℃、5%CO2孵箱培養。有些懸浮細胞趨于成團生長(cháng)，此時(shí)細胞生長(cháng)狀態(tài)良好，當補液時(shí)，需避免反復吹打。

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