Elabscience Caspase 2活性檢測試劑盒采用分光光度法,可用于檢測細胞、組織裂解液或其它樣本的 caspase 2 活性。那么你知道Elabscience Caspase 2活性檢測試劑盒樣本該如何處理嗎?讓我們一起來(lái)看看吧!
1. 細胞樣本
按照常規方法收集細胞沉淀,PBS 重懸細胞并計數,600×g 離心 5 min,棄上清,按照每 100 萬(wàn)細胞加入 100 μL Cell Lysis Buffer 的比例加入預冷的 Cell Lysis Buffer 重懸細胞, 在冰浴條件下裂解 30 min,裂解期間需渦旋震蕩 3~4 次,每 次 10 s。裂解后的樣本,于 4°C,11000 ×g 離心 10~15 min, 小心地吸取上清至新的 EP 管中,并置于冰上待用。同時(shí)使 用 Bradford 法(E-BC-K168-M)測定蛋白濃度。 注:檢測貼壁細胞時(shí),需收集誘導后產(chǎn)生的懸浮細胞,并與 后續收集的貼壁細胞一起檢測。
2. 組織樣本
取 50 mg 待測組織樣本,用 PBS 或者生理鹽水清洗 1-2 次, 去除組織中殘留的血細胞,用手術(shù)剪剪碎,加入 200 μL 預冷 的 Cell Lysis Buffer,進(jìn)行勻漿(在冰浴條件下進(jìn)行,若組織 質(zhì)量加倍時(shí),加入的預冷 Cell Lysis Buffer 也需加倍)。將勻 漿好的樣本轉移至 1.5 mL 離心管中,冰浴裂解 30 min。裂解 后的樣本,于 4°C,11000×g 離心 10~15 min,小心地吸取上 清至新的 EP 管中,并置于冰上待用。同時(shí)使用 Bradford 法 (E-BC-K168-M)測定蛋白濃度。 注:制備好的樣本應立即測定,若無(wú)法及時(shí)測定,可將裂解 后的上清保存在-80°C,2 周內進(jìn)行檢測。
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