Phos-tag™ 是一種能與磷酸離子特異性結合的功能分子，可與蛋白上的磷酸基團結合。在SDS-PAGE中，在有二價(jià)金屬離子（Mn2+/Zn2+）參與的條件下，磷酸化蛋白與Phos-tag™ 結合，電泳遷移速度變慢，從而與非磷酸化蛋白分離。

Wako的SuperSep™ Phos-tag™ 是一種即開(kāi)即用型的預制膠，含有50 μmol/L的Phos-tag™ 丙烯酰胺，含有Zn2+ 作為金屬離子，保存穩定性長(cháng)達半年，得到的條帶整齊。多種規格型號，適合Bio-rad/Life Technolofies/EasySeperator等多種電泳儀。全批次均經(jīng)過(guò)嚴格檢驗，保證能分離磷酸化與非磷酸化條帶。

應用實(shí)例：

1. β-casein

使用Tris-甘氨酸（TG），Tris-Tricine（TT）或Tris-MOPS（TM）三種不同runningbuffer比較β-casein在SuperSepTMPhos-tagTM預制膠中磷酸化蛋白的遷移率。

2. 鼠腦來(lái)源Dnmt1磷酸化實(shí)驗

從鼠腦提取液中純化得到GST-Dnmt1（1-290）結合蛋白，作為體外激酶實(shí)驗的反應底物，在SuperSep™ Phos-tag™ 預制膠中檢測到了激酶的存在。

3. 二維電泳分析hnRNP K磷酸化異構體

小鼠巨噬細胞J774.1 經(jīng)LPS 刺激后，裂解細胞，經(jīng)過(guò)免疫沉淀法分離得到hnRNP K。在二維電泳中，一維是IPG 膠，二維是SuperSep™ Phos-tag™ 預制膠，可分離hnRNP K 的異構體。利用質(zhì)譜儀確認不同的點(diǎn)代表不同的亞型或修飾蛋白。

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