Cas9是Rna引導的DNA核酸內切酶。該酶與CRISPR（聚集的規則間隔短回文重復序列）適應性免疫系統相關(guān)聯(lián)各種類(lèi)型的細菌，包括化膿性鏈球菌Casg，能夠解開(kāi)外源DNA（如質(zhì)粒DNA或入侵噬菌體DNA），然后檢查與20pacer互補的位點(diǎn)。指導RNA的區域。如果DNA底物與指導RNA互補，則Cas9切割入侵的DNA。Cas9蛋白作為基因組工程工具受到了quan世界的關(guān)注。DNA中的雙鏈斷裂導致的DNA斷裂可以使基因失活或通過(guò)非同源末端連接引入異源基因。和同源重組，分別在許多實(shí)驗室模型生物中。此外，Cas9幾乎可以切割與其相關(guān)的指導RNA互補的任何序列。在人類(lèi)細胞中使用CRISPR/Cas9系統已經(jīng)證明了基因缺失和基因替代。下面讓我們一起來(lái)看看Cas9 ELISA試劑盒(NB-E1372HS)的測定程序：

1. 向抗Cas9抗體包被的平板中加入100μlCas9未知樣品或標準品。每個(gè)Cas9未知樣品，標準品和空白品應一式兩份進(jìn)行測定。

2. 在室溫下在軌道振蕩器（200-500 rpm）上孵育1小時(shí)。

3. 每孔用250µL 1X洗滌緩沖液洗滌微孔條3次，每次洗滌之間che底抽吸。最后一次洗滌后，清空孔并在吸水墊或紙巾上輕敲微孔條，以除去多余的1X洗滌緩沖液。

4. 向每個(gè)孔中加入100µL稀釋的生物素化抗Cas9抗體。在室溫下在軌道振蕩器（200-500 rpm）上孵育1小時(shí)。

5. 根據上述步驟3，清洗帶孔3次。

6. 向每個(gè)孔中加入100μL稀釋的鏈霉親和素酶綴合物。在軌道振蕩器（200-500 rpm）上在室溫下孵育1小時(shí)。

7. 根據上述步驟3，清洗帶孔3次。立即進(jìn)行下一步。

8. 將基板溶液加熱至室溫。向每個(gè)孔（包括空白孔）中加入100μL底物溶液。在室溫下在軌道振蕩器上孵育。實(shí)際孵育時(shí)間可能在2-30分鐘之間變化。

9. 通過(guò)向每個(gè)孔（包括空白孔）中加入100µL終止溶液來(lái)終止酶反應。應立即讀取結果（顏色會(huì )隨著(zhù)時(shí)間的推移而褪色）。

10. 使用450 nm作為主波長(cháng)，在分光光度計上讀取每個(gè)微孔的吸光度。

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