在動(dòng)物細胞培養過(guò)程中，必須有可以貼附的支持物表面，其依靠自身分泌或培養基中的貼附因子才能在該表面生長(cháng)增殖的離體動(dòng)物的培養細胞。那么貼壁細胞培養的步驟有那些呢？讓我們一起來(lái)看看吧！

1. 將含有凍存細胞的安瓿放入37℃水浴中解凍。

2. 用70%乙醇對安瓿的頂端進(jìn)行消毒，打開(kāi)安瓿，用吸管將細胞轉移到含有5ml起始培養基的25cm2組織培養瓶中，輕輕搖動(dòng)培養瓶，使細胞均勻分布于培養瓶中，將其放入5%CO2加濕培養箱中37℃培養過(guò)夜。

3. 吸出起始培養基，換成適當的維持培養基。將細胞放回CO2培養箱37℃培養，每天檢查細胞是否生長(cháng)至匯片。

4. 如果細胞生長(cháng)至匯片，吸出培養基。

5. 用PBS或胰酶/EDTA清洗細胞，除去細胞上殘留的血清，將洗液吸出。

6. 用37℃、適當體積的胰酶/EDTA剛好覆蓋單層細胞（如對于25cm2培養瓶需要0.3ml）。消化30～40s（細胞應該分開(kāi)），晃動(dòng)培養瓶使細胞wan全分開(kāi)。

7. 加入1.4ml適當的維持培養基，用吸管來(lái)回吹打細胞懸液多次以打散細胞團（這些細胞用于傳代）。

8. 吸出0.5mL的細胞懸液，將其加入到新的含有30ml維持培養基的組織培養瓶中。輕輕搖動(dòng)培養瓶，使細胞均勻分布于培養瓶中，將其放入CO2培養箱中37℃培養直到細胞生長(cháng)至匯片（大約1周）。大約間隔一周用維持培養基進(jìn)行1:20稀釋傳代以維持細胞生長(cháng)。

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