基于NGS測序的諸多優(yōu)點(diǎn),故此技術(shù)在全球測序市場(chǎng)上占有著(zhù)絕對的優(yōu)勢位置,而新一代測序(NGS)文庫制備是一體化測序流程中的一個(gè)關(guān)鍵因素,那么什么是文庫構建呢?讓我們一起來(lái)看看吧!
基因文庫是儲存了某種生物的DNA片段的受體菌的集合體。文庫分為儲存全部DNA片段和部分DNA片段,前者叫基因組文庫,后者包括cDNA文庫。
文庫構建的基礎是將目標RNA或DNA制備成可以和測序儀器兼容的形式。從組織或者細胞中將DNA或RNA提取出來(lái),并通過(guò)機械破碎或者是酶切法對其進(jìn)行片段化。如果前面提取的是RNA樣本,則需要將RNA逆轉錄為cDNA。對DNA進(jìn)行接頭的連接后,一般還會(huì )有一個(gè)文庫的擴增,即通過(guò)PCR來(lái)對所需的目的片段進(jìn)行擴增,然后進(jìn)行上機測序。
傳統的DNA文庫構建包括:DNA片段化(超聲法)、末端修復、加A、接頭連接和PCR文庫擴增等過(guò)程(Figure 1)。整個(gè)實(shí)驗對DNA起始量、儀器有一定的要求。
新型的文庫構建方法利用轉座酶的轉座原理,對DNA進(jìn)行片段化并同時(shí)加上部分接頭序列,是建庫過(guò)程中是一個(gè)重大的進(jìn)步。
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