分離是原代細胞培養的重要步驟之一，那么你知道原代細胞培養的分離注意事項有什么嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！

一、組織塊培養法

1.組織塊接種后的前3天，在觀(guān)察和移動(dòng)的過(guò)程中，注意不要引起液體的振蕩。要避免經(jīng)常翻動(dòng)和振動(dòng)，否則組織塊不易附著(zhù)于瓶壁上或附著(zhù)后也會(huì )脫落飄起。

2.加入的培養液不宜過(guò)多，避免浸泡的組織塊受輕微的波動(dòng)而脫落下來(lái)。

3.當細胞向外遷徙出來(lái)后要注意記錄并去除漂浮的組織塊和殘留的細胞，它們產(chǎn)生的有毒物質(zhì)會(huì )影響原代細胞的生長(cháng)。

4.為促進(jìn)組織塊盡快粘貼在培養瓶皿上，可以在種植前先將膠原薄層涂在培養瓶底壁上。

二、貼壁型原代細胞

1.原代培養的分離細胞在初次接觸體外環(huán)境時(shí)，它們之間會(huì )互相影響，在這些細胞之間能產(chǎn)生一些促生長(cháng)的活性物質(zhì)，使細胞彼此互相促進(jìn)存活和生長(cháng)。如果接種的細胞密度過(guò)低，細胞之間的促生長(cháng)作用很小，也很難使細胞適應從體內的組織環(huán)境到被分散后進(jìn)入獨立生存環(huán)境的變化過(guò)程。如果接種的細胞密度過(guò)大，會(huì )導致?tīng)I養物質(zhì)供應不足，代謝廢物積累較快需要經(jīng)常換液和傳代。

2.適當增大原代培養接種的細胞密度，給培養的細胞提供更多的類(lèi)似于在體內時(shí)細胞之間的相互作用，會(huì )極大提高原代培養的細胞在體外存活率。待細胞適應體外環(huán)境后進(jìn)行傳代培養時(shí)再以較低的密度接種和培養。

3.盡快使接種的細胞貼壁，是決定培養能否成功的關(guān)鍵?？梢栽诮臃N后先將培養瓶置培養箱內培養3h到5h，待細胞貼壁后，再補足培養液繼續培養。

三、懸浮型原代細胞

1.必須保持細胞的懸浮狀態(tài)?？梢酝ㄟ^(guò)增加培養液的黏度來(lái)幫助細胞呈懸浮狀態(tài)，如給培養液中加入低濃度的透明質(zhì)酸復合物。在有攪拌裝置的培養器皿內加入培養液是，以5ml為zui低限度，否則攪拌時(shí)會(huì )產(chǎn)生氣泡對細胞造成傷害。使用這種方式需注意勿使攪拌速度過(guò)快，否則即可使培養液溢出又容易造成污染。如果培養液的量在5ml以下，可以采用旋轉瓶培養。給懸浮培養的細胞換液時(shí)要注意不要吸出細胞。

2.能夠進(jìn)行懸浮培養的細胞，其生命力一般都比較旺盛，體外分裂增殖的速度較快，營(yíng)養成分消耗大，換液時(shí)間隔一般較短。

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