細胞復蘇是指將凍存在液氮或者-70℃冰箱中的細胞解凍之后重新培養,細胞恢復生長(cháng)的過(guò)程。那么你知道在細胞復蘇過(guò)程中有何注意事項嗎?讓我們一起來(lái)看看吧!
1. 取凍存細胞時(shí)應做好防護措施,戴好防凍手套,護目鏡。如果凍存管密封不嚴,液氮可被吸入。由于解凍時(shí)凍存管中的氣溫急劇上升,將可能發(fā)生爆炸。
2. 細胞放入水浴中復蘇時(shí)注意用鑷子夾住細胞凍存管并在水浴中不時(shí)晃動(dòng),使其受熱均勻,且速度越快越好,這樣可以最大限度的保存細胞活力,并防止水浴鍋的水進(jìn)入細胞凍存管造成細胞污染。
3. 打開(kāi)細胞凍存管之前要用酒精棉球將凍存管消毒并晾干。注意無(wú)菌操作,細胞復蘇后的操作在4℃冰盒中進(jìn)行,以減少冷凍保護劑對細胞的毒性。
4. 解凍時(shí)間在2min以?xún)韧瓿?,且整個(gè)過(guò)程盡量避免吹打細胞產(chǎn)生氣泡,導致細胞復蘇后的生長(cháng)狀態(tài)不佳。
5. 復蘇細胞的時(shí)候盡量避免凍存管接縫處沾水,防止支原體污染,實(shí)驗室定期用過(guò)氧化氫熏蒸,細胞小黑點(diǎn)增多時(shí)用支原體檢測試劑盒檢測,并且及時(shí)清除。
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