熒光定量PCR（Real-time PCR），是指在PCR擴增反應體系中加入熒光基團，通過(guò)對擴增反應中每一個(gè)循環(huán)產(chǎn)物熒光信號的實(shí)時(shí)檢測,最后通過(guò)標準曲線(xiàn)對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。那么你知道熒光定量PCR的應用嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！

一、分子生物學(xué)研究

1.核酸定量分析：

對傳染性疾病進(jìn)行定量定性分析，病原微生物或病毒含量的檢測 , 比如近期流行的甲型H1N1流感， 轉基因動(dòng)植物基因拷貝數的檢測，RNAi 基因失活率的檢測等。

2.基因表達差異分析：

比較經(jīng)過(guò)不同處理樣本之間特定基因的表達差異 ( 如藥物處理、物理處理、化學(xué)處理等 ) ，特定基因在不同時(shí)相的表達差異以及cDNA芯片或差顯結果的確證。

3.SNP 檢測：

檢測單核苷酸多態(tài)性對于研究個(gè)體對不同疾病的易感性或者個(gè)體對特定藥物的不同反應有著(zhù)重要的意義，因分子信標結構的巧妙性，一旦SNP 的序列信息是已知的，采用這種技術(shù)進(jìn)行高通量的 SNP 檢測將會(huì )變得簡(jiǎn)單而準確。

4.甲基化檢測：

甲基化同人類(lèi)的許多疾病有關(guān)，特別是癌癥， Laird 報道了一種稱(chēng)作 Methylight的技術(shù)，在擴增之前先處理 DNA ，使得未甲基化的胞嘧啶變成尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不受影響，用特異性的引物和 Taqman探針來(lái)區分甲基化和非甲基化的 DNA ，這種方法不僅方便而且靈敏度更高。

二、醫學(xué)研究

5.產(chǎn)前診斷：

人們對遺傳性物質(zhì)改變引起的遺傳性疾病還無(wú)法治療，到目前為止，還只能只能通過(guò)產(chǎn)前監測，減少病嬰出生，以防止各類(lèi)遺傳性疾病的發(fā)生，如為減少 X連鎖遺傳病患兒的出生，從孕婦的外周血中分離胎兒DNA，用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測其Y性別決定區基因是一種無(wú)創(chuàng )傷性的方法，易為孕婦所接受。

6.病原體檢測：

采用熒光定量PCR檢測技術(shù)可以對淋球菌、沙眼衣原體、解脲支原體、人類(lèi)乳頭瘤病毒、單純皰疹病毒、人類(lèi)免疫缺陷病毒、肝炎病毒、流感病毒、 結核分枝桿菌、EB病毒和巨細胞病毒等病原體進(jìn)行定量測定。與傳統的檢測方法相比具有靈敏度高、取樣少、快速簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)。

7.藥物療效考核：

對乙型肝炎病毒 (HBV)、丙型肝炎病毒 (HCV) 定量分析顯示：病毒量與某些藥物的療效關(guān)系。HCV高水平表達，干擾素治療作用不敏感，而HCV低滴度，干擾素作用敏感；在拉米夫定治療過(guò)程中，HBV- DNA的血清含量曾有下降，隨后若再度上升或超出以前水平，則提示病毒發(fā)生變異。

8.腫瘤基因檢測：

盡管腫瘤發(fā)病的機理尚未清楚，但相關(guān)基因發(fā)生突變是致癌性轉變的根本原因已被廣泛接受。癌基因的表達增加和突變，在許多腫瘤早期就可以出 現。實(shí)時(shí)熒光定量 PCR不但能有效地檢測到基因的突變，而且可以準確檢測癌基因的表達量。目前用此方法進(jìn)行過(guò)端粒酶hTERT基因、慢性粒細胞性白血病WT1基因、腫瘤 ER基因、前列腺癌PSM基因、腫瘤相關(guān)的病毒基因等多種基因的表達檢測。

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