• 什么是血清

血清，指血液凝固后，在血漿中除去纖維蛋白原及某些凝血因子后分離出的淡黃色透明液體或指纖維蛋白原已被除去的血漿。

• 血清在細胞培養中的作用

血清的成分多樣，可以給細胞提供：

1. 基本營(yíng)養物質(zhì)，如氨基酸、維生素、脂類(lèi)物質(zhì)、無(wú)機物、核酸衍生物等細胞生長(cháng)必需的物質(zhì)；

2. 激素：胰島素、促生長(cháng)激素、類(lèi)固醇激素如睪酮和孕酮、腎上腺皮質(zhì)激素如地塞米松等。

3. 生長(cháng)因子：表皮生長(cháng)因子、成纖維細胞生長(cháng)因子、血小板生長(cháng)因子、神經(jīng)細胞生長(cháng)因子等；

4. 結合蛋白：結合蛋白在細胞代謝過(guò)程中起著(zhù)重要作用，它能攜帶重要地低分子量物質(zhì)，如轉鐵蛋白結合鐵離子，白蛋白攜帶維生素、激素等；

5. 促接觸和伸展因子使細胞貼壁免受機械損傷；

6. 蛋白酶抑制劑：中和某些細胞(如內皮細胞等)釋放的蛋白酶，從而對培養中的細胞起到某些保護作用；

7.血清含有的一些微量元素和離子在代謝解毒中起重要作用，如SeO₃，硒等；

8.血清蛋白使血清具有一定的粘度，可以保護細胞免受機械損傷，如懸浮培養攪拌時(shí)保護細胞。

• 常用的血清

目前常用的血清有胎牛血清、新生牛血清和小牛血清。

以上三種血清中胎牛血清的品質(zhì)ZUI高，因為胎牛還未接觸外界，血清中所含的抗體、補體等對細胞有害的成分最少，因此價(jià)格也最高。

• 血清的使用與選擇

血清的使用濃度一般在5%~20%，常用是10%。

有些細胞需要胎牛血清才能生長(cháng)，而有些細胞有小牛血清就能生長(cháng)。因此，要根據具體用途與需要選擇合適的血清。

• 血清的儲存與解凍

1.儲存：建議將血清儲存在-5℃~-20℃（HyClone胎牛血清建議儲存在-10℃）。注意：建議不要將血清儲存在-80℃中！（因為儲存在-80℃，解凍時(shí)巨大的溫差會(huì )使血清產(chǎn)生更多的沉淀。）

2.解凍：不建議于4℃過(guò)夜解凍，也不建議直接將冷凍的血清放在37℃水浴或者溫箱中解凍，因為若血清沒(méi)有混勻，底部的蛋白會(huì )變性形成沉淀。

血清解凍的方法（三步法）如下：

注：在水浴過(guò)程中，血清要*浸入水中，同時(shí)在融化過(guò)程中要慢慢搖動(dòng)瓶身混勻血清，但在搖動(dòng)中盡量不要產(chǎn)生泡沫。

血清在解凍后，可以根據實(shí)驗需求分裝成單次用量，密封好后立即放回-20℃冰箱繼續儲存以供進(jìn)一步使用，這樣可以有效避免反復凍融的問(wèn)題。

• 血清出現沉淀或絮狀物質(zhì)的原因

1. 2-8℃長(cháng)時(shí)間儲存。

2. 解凍過(guò)程中未混勻。

3. γ-輻照：不會(huì )損害血清的理化特性或細胞培養性能。

4. 反復凍融：使血清脂蛋白發(fā)生變性造成渾濁。

5. 血清中殘留的纖維蛋白原：殘留的纖維蛋白原在解凍后會(huì )轉化為纖維蛋白，過(guò)量的纖維蛋白在血清中表現為可見(jiàn)的絮狀物質(zhì)。

去除方法：400 g離心。不建議直接過(guò)濾血清以去除絮狀物質(zhì)，因為過(guò)濾器可能會(huì )堵塞或者截留重要的蛋白質(zhì)。

6. 磷酸鈣：磷酸鈣在血清中通常呈云狀，并且在倒置顯微鏡下觀(guān)察會(huì )看到可以自由移動(dòng)的小黑點(diǎn)，因此磷酸鈣沉淀通常被誤認為是微生物污染物。

檢測是否污染方法：將1 mL待測血清直接倒在細菌瓊脂平板上，在37℃培養之后觀(guān)察菌落的生長(cháng)情況。在油鏡（放大1000倍）下觀(guān)察革蘭氏染色，以確定是否受到污染。不建議用37℃孵育的血清直接檢測無(wú)菌性，因為在37℃孵育之后，血清中的磷酸鈣沉淀物會(huì )增加。

• 國內購買(mǎi)胎牛血清的現狀

難辨真假，產(chǎn)地不實(shí)，有的甚至都不是牛血清。非正規胎牛血清產(chǎn)品會(huì )直接影響實(shí)驗的結果和穩定以及數據的真實(shí)性，對實(shí)驗造成很大的影響。因此，購買(mǎi)血清產(chǎn)品時(shí)一定要選擇可靠的產(chǎn)品！

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4.完整的來(lái)源地可追溯性；

5.低抗體含量，高生長(cháng)因子；

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