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PEI線(xiàn)性轉染試劑的具體操作流程是怎樣的

 更新時(shí)間:2022-06-26 點(diǎn)擊量:1003
 
  PEI線(xiàn)性轉染試劑是由一種陽(yáng)離子聚合物轉染試劑,分子量40000,它能與核酸形成復合物,并使該復合物進(jìn)入哺乳動(dòng)物細胞。線(xiàn)性PEI轉染試劑廣泛適。該試劑可在含血清與抗生素的*培養基中發(fā)揮作用,即使在有血清存在的情況下,它仍然能高效的將核酸導入細胞。實(shí)驗操作簡(jiǎn)單,對大多數培養細胞都有較高的轉染效率(用于常見(jiàn)細胞系,如HEK-293、HEK293T、HepG2、Hela、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3和Sf9等),并且細胞毒性較低。
  PEI線(xiàn)性轉染試劑的操作流程:
  1、細胞鋪板
  提前一天將細胞種植在六孔板中,以轉染時(shí)細胞密度在70%~80%為宜。
  2、轉染過(guò)程
 ?。?)在轉染前2h,移除細胞上原有的培養基,換為新鮮的*培養基。
 ?。?)將2ug質(zhì)粒DNA用50uL無(wú)血清稀釋液稀釋?zhuān)浞只靹蛑瞥蒁NA稀釋液。
  注意:無(wú)血清稀釋液建議采用Opti-MEM或ddH2O
 ?。?)向DNA稀釋液中直接加入4uL轉染試劑,室溫靜置10~15min。轉染復合物配制完成。
 ?。?)將轉染復合物加入細胞培養基中,輕柔混勻。
 ?。?)繼續培養24~48h,收取細胞進(jìn)行鑒定或加入相應抗生素篩選穩定克隆。
 ?。?)使用本產(chǎn)品轉染后一般在24h開(kāi)始進(jìn)入表達高峰期,36~48h達到表達高峰,相對于脂
  質(zhì)體轉染試劉,達到峰值的時(shí)間延后約6~12h。
  PEI線(xiàn)性轉染試劑的注意事項:
  1)本產(chǎn)品對細胞非常溫和,一般情況下轉染后無(wú)需進(jìn)行換液操作。
  2)為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。
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