細胞轉染是將外源性基因導入細胞內的一種專(zhuān)門(mén)技術(shù)。隨著(zhù)基因與蛋白功能研究的深入,轉染目前已成為實(shí)驗室工作中經(jīng)常涉及的基本方法。轉染大致可分為物理介導、化學(xué)介導和生物介導三類(lèi)途徑。電穿孔法、顯微注射和基因槍屬于通過(guò)物理方法將基因導入細胞的范例;化學(xué)介導方法很多,如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法、脂質(zhì)體轉染方法、和多種陽(yáng)離子物質(zhì)介導的技術(shù);生物介導方法,有較為原始的轉染,和現在比較多見(jiàn)的各種病毒介導的轉染技術(shù)。
細胞轉染的幾種方法:
1.脂質(zhì)體轉染法
陽(yáng)離子脂質(zhì)體表面帶正電荷,能與核酸的磷酸根通過(guò)靜電作用,將包裹入內,形成DNA脂復合物,也能被表面帶負電的細胞膜吸附,再通過(guò)融合或細胞內吞進(jìn)入細胞。適用于把DNA轉染入懸浮或貼壁培養細胞中,是目前實(shí)驗室方便的轉染方法之一,其轉染率較高,優(yōu)于磷酸鈣法。由于脂質(zhì)體對細胞有一定的毒性,所以轉染時(shí)間一般不超過(guò)24小時(shí)。常用細胞類(lèi)型:cos-7 、BHK、NIH3T3 、Hela等。
2.電穿孔轉染法
電流能夠可逆地擊穿細胞膜形成瞬時(shí)的水通路或膜上小孔促使DNA分子進(jìn)入胞內,這種方法就是電穿孔。當遇到某些脂質(zhì)體轉染效率很低或幾乎無(wú)法轉入時(shí)建議用電穿孔法轉染。一般情況下,高電場(chǎng)強度會(huì )殺死50%-70% 的細胞?,F在針對細胞死亡開(kāi)發(fā)出了一種電轉保護劑,可以大大的降低細胞的死亡率,同時(shí)提高電穿孔轉染效率。
3.病毒感染
對于脂質(zhì)體轉染與電穿孔轉染都無(wú)法成功轉染的細胞系建議用病毒感染,此法可以快速感染,檢測成功率高。