Elisa生物檢測是一種敏感度高,同時(shí)特異性強,重復性好的實(shí)驗檢測方法,由于其試劑穩定、易保存,操作簡(jiǎn)便,結果判斷較客觀(guān)等因素,已廣泛應用在免疫學(xué)檢驗的各領(lǐng)域中。
目前市面上的Elisa試劑盒檢測原理主要有以下四種:直接法,間接法,夾心法,競爭法。
Elisa試劑盒評價(jià)標準:
① 準確性:標準品線(xiàn)性回歸與預期濃度相關(guān)系數R值,應大于等于0.9900。
② 靈敏度:反應試劑盒的檢測濃度最小值
③ 特異性:不與其它可溶性結構類(lèi)似物交叉反應。
④ 重復性:板內、板間變異系數
⑤ 回收率:判斷實(shí)驗的準確性和特異性
Elisa試劑盒的標準曲線(xiàn):
標曲R值是幾個(gè)9才合格?
實(shí)驗室應按檢測標準(方法)的要求使用標準溶液或標準物質(zhì)建立標準曲線(xiàn)。所用標準溶液或標準物質(zhì)應覆蓋被測樣品的濃度范圍。檢測標準(方法)如無(wú)具體的要求,至少使用5個(gè)標樣(除空白外)建立線(xiàn)性標準曲線(xiàn),每個(gè)點(diǎn)重復測定1-3次,對于篩選方法,線(xiàn)性回歸方程的相關(guān)系數不應低于0.98,對于確證方法,相關(guān)系數不應低于0.99。
其實(shí),大于0.99是判斷是否為線(xiàn)性相關(guān)的一個(gè)標準,實(shí)際應用中線(xiàn)性大于0.999才是比較理想的。線(xiàn)性在0.99到0.999之間的監測結果只用接近最高濃度一半(中間濃度)的位置才比較準確,如果線(xiàn)性大于0.999的話(huà),在整個(gè)線(xiàn)性范圍內都會(huì )有一個(gè)比較滿(mǎn)意的結果。
如果檢測的線(xiàn)性不好,可以減少標準的覆蓋范圍,將標準的濃度調整到待測樣品濃度附近,這樣結果也是非常準確的。例如,樣品的濃度約20ppb,但在0~50ppb范圍建立標準曲線(xiàn),但線(xiàn)性非常不理想,這時(shí)可以將標準范圍調整到15~25ppb之間,作五個(gè)標準。
可以檢測檢測各類(lèi)食品,飼料,組織及生物液體中真菌毒素、抗生素、食品添加劑以及其他細菌蛋白的ELISA試劑盒:
1.抗生素類(lèi):氨芐青霉素,貨號:E4350,樣本:血清,尿液,牛奶,組織
檢測食品中抗生素的殘留
樣本類(lèi)型:組織、血清、牛奶、雞蛋和其他生物樣本
真菌毒素是真菌產(chǎn)生的低分子量次級代謝產(chǎn)物
2.真菌毒素:總黃曲霉毒素,貨號:E4747,樣本:酒、醬油、醋、谷物、花生、配方飼料、食用油
樣品類(lèi)型:玉米、谷物、花生、大米、大豆等。
食品受到生物和環(huán)境污染物的污染發(fā)生在生產(chǎn)和加工的幾個(gè)階段
3.食品添加劑: 沙丁胺醇,貨號:K4209,樣本:豬尿、組織、飼料
樣品類(lèi)型:牛奶、肉類(lèi)、玉米、谷物、花生、大米、大豆,等。
表達蛋白經(jīng)過(guò)幾個(gè)純化步驟后,宿主細胞蛋白仍然可以以較高濃度存在,甚至會(huì )與原料藥一起純化和濃縮;樣品類(lèi)型:細胞裂解液、其他生物液
4.宿主細胞蛋白:CHO 宿主細胞蛋白,貨號:E4537,樣本:細胞裂解液,其他生物液體
5.其他毒素:雙酚A(BPA),E4722,樣本:細胞裂解液,其他生物液體
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