酶聯(lián)免疫吸附測定（enzyme linked immunosorbent assay，簡(jiǎn)寫(xiě)ELISA或ELASA）指將可溶性的抗原或抗體結合到聚苯乙烯等固相載體上，利用抗原抗體特異性結合進(jìn)行免疫反應的定性和定量檢測方法。

Elisa的檢測方法有哪些？讓我們一起來(lái)看看吧！

常見(jiàn)的有直接法、間接法、競爭法基雙抗夾心法，其中直接法和競爭法應用較少，應有最多的是雙抗夾心法，讓我們一一來(lái)看看它們是如何操作的吧！

一、直接法

將抗原固定于ELISA班上，然后用酶標抗體直檢測抗原。相較于其他類(lèi)型的ELISA實(shí)驗，直接ELISA實(shí)驗步驟少，檢測速度快，不需要用到二抗，避免了交叉反應，檢測結果不容易出錯，但是由于直接ELISA的抗原不是特異性固定的，樣本中的靶蛋白及其他雜質(zhì)蛋白都會(huì )與ELISA版結合，實(shí)驗背景會(huì )比較高，而且直接ELISA每種靶蛋白都需要準備能夠與其特異性結合的一抗，實(shí)驗不太靈活。另外由于沒(méi)有使用二抗，信號沒(méi)有被放大，降低了測定的靈敏度。

二、間接法

將抗原固定于ELISA班上，隨后分兩步進(jìn)行檢測：首先加入檢測抗體于抗原特異性結合，隨后加入酶標二抗檢測并利用底物顯色。于直接ELISA相比，間接ELISA用到酶標二抗，具有更高的靈敏度，也需要更少的標記抗體，更經(jīng)濟，間接ELISA還提供了更大的靈活性，該方法的缺點(diǎn)有：存在交叉反應的可能性（酶標二抗直接與抗原結合），可能會(huì )增加背景，同時(shí)與直接ELISA相比，間接ELISA實(shí)驗多了二抗孵育的步驟，實(shí)驗周期延長(cháng)。

三、夾心法

被檢測的抗原包被再兩個(gè)抗體之間其中一個(gè)抗體將抗原固定于載體上，即捕捉抗體，另一個(gè)則是檢測抗體，此抗體可用酶標記后直接測定抗原的量，或不標記，再透過(guò)酶標記的二級抗體來(lái)測定抗原的量，這兩種抗體必須小心選取，才可以避免交互反應貨競爭相同額抗原結合部位。

四、競爭法

預先將抗原包被再固相載體上，并加入酶標記的特異性抗體，實(shí)驗是，加入待檢抗原（或抗體），如果待檢物是抗原，則待檢抗原于預先包被再固相載體上的抗原競爭結合酶標抗體，如果待檢測物是抗體，則待檢抗體就與系統中原有的酶標抗體競爭結合包被再固相載體上的抗原，通過(guò)洗滌洗掉被競爭結合的酶標抗體，最后加底物顯色，需要注意的是顯色結果與待檢抗原（或抗體）的量成反比。競爭法相對以上的三種方法更復雜一些，但以上三種方法都適用于競爭法，其主要有點(diǎn)在于可檢測不純的樣品，且數據再現性高，但存在整體敏感性和專(zhuān)一性較差的問(wèn)題。

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